Хмельницький нацiональний унiверситет |
Бiологiя |
Лабораторна робота: Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом |
Лабораторна робота №3 Тема. Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом Мета: ознайомлення з методами фарбування препаратів і відпрацювання техніки фарбування мазків складним методом за Грамом. Обладнання і матеріали: фіксований мазок, фільтрувальний папір, розчин карболового генціанвіолету, розчин Люголя, 96 % спирт, дистильована вода, фуксин Циля. Хід роботи Для вивчення форм, розміру клітин, морфологічних властивостей використовують прості і складні методи фарбування. Простий метод фарбування. При цьому методі фарбування використовується одна фарба. На фіксований мазок наливають декілька крапель розчину фуксину чи метиленового синього на 1-2 хвилини, потім фарбу промивають водою, висушують мазок фільтрувальним папером і розглядають з імерсійним маслом під мікроскопом. Складний метод фарбування. Для складного фарбування застосовують декілька фарб. У лабораторній практиці зі складних методів фарбування найчастіше застосовують фарбування за Грамом. 1. Для цього на фіксований мазок, покритий смужкою фільтрувального паперу, наливають розчин карболового генціанвіолету на 1-2 хвилини. 2. Зливають фарбу і, не промиваючи водою, наливають на мазок розчин Люголя на 1-2 хвилини. 3. Зливають розчин Люголя і, не промиваючи водою, занурюють в стаканчик з 96 % спиртом на 25-30 хвилин. 4. Ополіскують мазок дистильованою водою і дофарбовують розчином фуксину Циля (1-2 хвилини), зливають фарбу, промивають водою і висушують фільтрувальним папером. У зв’язку з тим, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору. Зробіть висновок, чому необхідно дотримуватись саме такої послідовності фарбування мікроорганізмів за методом Грама? Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи. |
|